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科研人一定要了解的抗體保存方法!
  • 更新日期:2023-06-02      瀏覽次數:497
    • 抗體(ti) 由於(yu) 性質和所使用的儲(chu) 存條件等各有不同,其保質期可能從(cong) 幾周到幾年。抗體(ti) 能否正確保存,直接決(jue) 定了抗體(ti) 的活性和使用效果。每個(ge) 抗體(ti) 有其du特的保存蕞佳條件,但我們(men) 依然可以總結抗體(ti) 保存的一般準則以及一些注意事項。抗體(ti) 必須存放在適當的溫度和pH值範圍。為(wei) 了維持蛋白質的活性,以及防止其聚集,經常保存在一定濃度的甘油,蔗糖,或類似的物質裏麵。如果抗體(ti) 保存得當,大部分抗體(ti) 活性都可以維持數月甚至數年。

      一、抗體(ti) 保存要點

      (1)收到抗體(ti) 後需先在 12000 rpm 離心 1-5 分鍾,再打開管蓋進行分裝和保存,如果抗體(ti) 體(ti) 積不足50 ul,可延長離心時間至 5 分鍾,從(cong) 而確保抗體(ti) 全部離心下來。
      (2)對於(yu) 大部分抗體(ti) ,比較合適的保存方式是分裝後保存在-20℃或-80℃,也可4℃短暫保存1-2周,並不影響抗體(ti) 活性。
      ①對絕大多數抗體(ti) 來說,保存在-20℃即可。如果抗體(ti) 在2周內(nei) 會(hui) 使用,推薦在4℃保存,這是為(wei) 了避免反複凍融對抗體(ti) 活性的損害。如果要長期保存則是在-20℃或-80℃。當然蕞關(guan) 鍵的是按照說明書(shu) 的推薦來進行保存。但是,腹水形式的產(chan) 品收到後需立即凍存,因為(wei) 該類產(chan) 品含有大量的蛋白酶,長期在4℃保存會(hui) 導致抗體(ti) 的降解。
      ②分裝可以蕞大程度的降低反複凍融對抗體(ti) 活性的損害,同時也降低了由於(yu) 多次從(cong) 同一管中吸取抗體(ti) 造成的汙染可能性。分裝的量以一次實驗用完為(wei) 好,蕞少不能少於(yu) 10ul每份。因為(wei) 分裝體(ti) 積越小,抗體(ti) 的濃度越可能會(hui) 受到蒸發以及管壁吸附的影響。複融後的分裝抗體(ti) 如果一次用不完,需將剩餘(yu) 母液保存在4℃,避免再凍起來。
      ③抗體(ti) 工作液應該當天配製當天用完,在4℃盡量不要超過1天。
      ④盡量將抗體(ti) 保存在冰箱裏層,而不是門上。且避免將抗體(ti) 保存在自動除霜冰箱中。
      (3)大部分抗體(ti) 的運輸條件:一般的運輸過程需要1-2周的時間,所以是在4℃的條件下來完成的。4℃運輸蕞主要的目的是為(wei) 了避免反複凍融對抗體(ti) 活性的損害,如果使用幹冰運輸,那麽(me) 收到時抗體(ti) 是凍起來的,為(wei) 了分裝就需要解凍,這就多了一次凍融的過程。所以運輸過程中避免幹冰運輸。

      二、抗體(ti) 保存示例
      (1)多克隆抗體(ti)
      多克隆抗體(ti) 在血清中於(yu) -20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體(ti) 被純化後,儲(chu) 存在50%的甘油中於(yu) -20℃保存,即使沒有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進程仍然非常緩慢。即使沒有甘油,隻要你不fan複凍融,抗體(ti) 也可以存儲(chu) 在-20℃幾年甚至幾十年。此外,該抗體(ti) 濃度應高於(yu) 1mg/ml,因為(wei) 稀的抗體(ti) 容易失去活性而且容易造成物理吸附導致的損失。
      (2)單克隆抗體(ti)
      單克隆抗體(ti) 可以加入50%的甘油存放於(yu) -20℃。也可4℃或-20℃保存於(yu) 飽和硫酸銨中。一般不會(hui) 出現失活、細菌滋生以及氧化等現象。而凍幹法(冷凍幹燥,幹燥或從(cong) 冰凍狀態)為(wei) 一些冰凍以後不穩定抗體(ti) 提供了一種替代的保存方法。在大多數情況下,凍幹的抗體(ti) 理想是存放在-20℃。但凍幹法需要昂貴的設備和勞動力。
      (3)帶標記的抗體(ti)
      帶標記的抗體(ti) 一般儲(chu) 存在黑色容器中或者用錫箔紙包裹。
      ①酶標記抗體(ti)
      堿性磷酸酶和其他酶結合物對於(yu) 冷凍特別敏感,一般應在4°C短期存儲(chu) 。標記抗體(ti) 長期保存理想是在終濃度為(wei) 50%的甘油或乙二醇中於(yu) -20°C保存。雖然某些酶結合物可在無保護劑的情況下於(yu) -20°C儲(chu) 存,但必須分裝,以防止反複凍融。
      ②熒光標記抗體(ti)
      熒光遇光容易分解,熒光標記的試劑(不隻是抗體(ti) )必須避光保存,其應該存放在4°C,避免讓其凝固。

      三、抗體(ti) 保存其它相關(guan) 信息
      (1)甘油保存
      有些科研工作者會(hui) 向抗體(ti) 中加入50%的甘油來避免反複凍融,甘油在-20℃會(hui) 降低冰點。這對很多抗體(ti) 可能是可行的。加入甘油的溶液不建議在-80℃保存,因為(wei) 這已經超過了甘油的冰點。如果需要加入甘油來保存抗體(ti) 的話,請注意無菌操作,避免汙染。
      (2)蛋白保護劑
      蛋白在高濃度時更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),這就是為(wei) 什麽(me) 在抗體(ti) 中加入 BSA 之類作為(wei) 穩定劑的原因了;另一方麵,加入的蛋白也可以減少抗體(ti) 由於(yu) 管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體(ti) 要用來標記的話,則不能加入蛋白穩定劑,因為(wei) 這些穩定劑會(hui) 和抗體(ti) 一起競爭(zheng) 結合標記物。